THP-1細(xì)胞，這是一種可以分化為巨噬細(xì)胞的人類白血病單核細(xì)胞系。這允許在無(wú)直接細(xì)胞接觸交互作用的情況下，研究巨噬細(xì)胞分泌體對(duì)共培養(yǎng)癌癥細(xì)胞的影響（例如，對(duì)生長(zhǎng)、藥物反應(yīng)或基因表達(dá)的影響），體外THP-1單核細(xì)胞分化為極化巨噬細(xì)胞用于研究M1和M2型巨噬細(xì)胞群體對(duì)其他細(xì)胞的影響，M1型巨噬細(xì)胞通常被認(rèn)為是抑制腫瘤的，而M2型巨噬細(xì)胞被認(rèn)為具有組織修復(fù)和腫瘤生長(zhǎng)促進(jìn)活性，因此thp-1擁有的兩極分化是很多實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，以下是THP-1分化實(shí)驗(yàn)步驟，點(diǎn)贊收藏，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)不迷路。

準(zhǔn)備材料：

Transwell inserts 0.4 μM，THP細(xì)胞（啟達(dá)生物，貨號(hào)：CD0122)，1640含有10%FBS的正常培養(yǎng)基（啟達(dá)生物，貨號(hào)：MD0201）

(資料圖片僅供參考)

，IL4、IL13、IFN-γ儲(chǔ)備溶液、PMA（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)步驟）LPS（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)步驟）

1.THP-1細(xì)胞在RPMI/FCS培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)，一旦接種到transwell插入物中就進(jìn)行激活。使用手套在插入物的無(wú)菌邊緣處理插入物。

2.使用血細(xì)胞儀對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，制成濃度為1×105個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸浮液。

3.然后通過(guò)每6個(gè)孔加入2ml RPMI/FCS培養(yǎng)基來(lái)制備一個(gè)6孔板。然后將transwell插入物放入含有2ml培養(yǎng)基的6孔中。

4.將2ml THP-1細(xì)胞懸浮液加入到插入物中（2x105個(gè)細(xì)胞/插入物）。

THP-1細(xì)胞一旦沉淀，立即用10 ng/ml 12-O-十四烷?；鵫orbol-l3-乙酸酯（PMA）處理24小時(shí)（1μl儲(chǔ)備溶液，總體積為4 ml）。

1.在PMA中活化的THP-1細(xì)胞24小時(shí)后在transwell插入物分化。

2.通過(guò)添加2ml新鮮RPMI/FCS培養(yǎng)基來(lái)制備新的6孔板。

3.然后從含有活化THP-1細(xì)胞的插入物中輕輕吸出含有PMA的培養(yǎng)基，并將插入物轉(zhuǎn)移到新的6孔板上

4.然后將2ml RPMI/FCS培養(yǎng)基加入插入物中，并在處理前放置1小時(shí)。

5.然后用所需的細(xì)胞因子混合物處理插入物：

A.M1分化可以通過(guò)用15 ng/ml脂多糖（LPS）（1.5μl儲(chǔ)備溶液轉(zhuǎn)化為4ml）或50 ng/ml IFN-γ（2μl儲(chǔ)備液轉(zhuǎn)化為4ml）處理來(lái)實(shí)現(xiàn)。

B.M2分化可以通過(guò)用25 ng/ml IL4和25 ng/ml IL13（1μl儲(chǔ)備溶液加入4 ml）聯(lián)合處理來(lái)實(shí)現(xiàn)。

未分化但活化的THP-1細(xì)胞在插入物中未經(jīng)處理以用作活化但未分化的單核細(xì)胞的參考孔。

在這個(gè)階段，可以通過(guò)免疫熒光、ELISA或特異性標(biāo)記物（如IL1、IL10、精氨酸酶）的基因表達(dá)分析來(lái)評(píng)估向M1和M2型巨噬細(xì)胞的正確分化。